細(xì)胞保種

【實驗材料】細(xì)胞、DMSO、0.25% Trypsin-EDTA（或細(xì)胞刮刀）、100 X雙抗、PBS、胎牛血清、DMEM 完-全培養(yǎng)基、75% 乙醇、胰酶、異丙醇；

【儀器與用品】凍存管、37度恒溫水浴鍋、培養(yǎng)皿（6 cm）、細(xì)胞凍存盒（已添加異丙醇）或凍存泡沫盒、記號筆、-80度冰箱、倒置相差顯微鏡、凍存管、37度恒溫水浴鍋、培養(yǎng)皿（6cm）、液氮罐、離心機(jī)、細(xì)胞房專用超凈臺、移液槍及移液槍頭（無菌或滅菌后烘干）、一次性細(xì)胞計數(shù)板、細(xì)胞自動計數(shù)儀、培養(yǎng)箱、移液管。

1、液氮凍存不建議用國產(chǎn)凍存管，復(fù)蘇時容易爆管；

2、消化細(xì)胞時，不能過度消化；

3、DMSO溶于DMEM培養(yǎng)基會放熱，應(yīng)提前5-10分鐘配置凍存液。用凍存盒時避免異丙醇將標(biāo)記擦掉；

4、二甲基亞砜能穿透許多合成的或天然的膜，包括皮膚和橡膠手套。因此，應(yīng)謹(jǐn)慎處理。將凍存管放入液氮時，必須使用保護(hù)性手套和面罩。

1、細(xì)胞消化過度，導(dǎo)致復(fù)蘇時細(xì)胞狀態(tài)不好；

2、負(fù)八十冰箱中長期保存細(xì)胞效果不好，應(yīng)及時將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中；

3、國產(chǎn)凍存管在液氮中容易漏液氮，導(dǎo)致復(fù)蘇時曝管，所以放液氮中盡量使用質(zhì)量較好的凍存管。

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