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    無(wú)菌操作的注意事項(xiàng)(1)

    發(fā)布時(shí)間: 2024-05-28  點(diǎn)擊次數(shù): 436次

    細(xì)胞培養(yǎng)需要無(wú)菌技術(shù)。


    什么是無(wú)菌技術(shù)?它和普通的實(shí)驗(yàn)操作有什么區(qū)別?


    首先,無(wú)菌技術(shù)是通過(guò)制定一個(gè)嚴(yán)格的操作規(guī)范來(lái)約束每個(gè)人做實(shí)驗(yàn)的行為規(guī)范,從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環(huán)境的微生物和細(xì)胞之間建立起一道屏障。


    這道屏障有兩層含義:

    1.讓細(xì)胞從物理上和外部非無(wú)菌的物品隔絕,不讓它們直接接觸


    2.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)操作時(shí),所有步驟不能讓細(xì)胞和外部非無(wú)菌環(huán)境建立直接聯(lián)系


    說(shuō)白了,就是從各個(gè)環(huán)節(jié)、細(xì)節(jié)上去盡力做到?jīng)]有過(guò)失。


    實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)面

    無(wú)菌操作的注意事項(xiàng)(1)

    在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作,操作臺(tái)面的使用有以下注意事項(xiàng):

    1 用之前,無(wú)論上一個(gè)使用者是否有擦拭臺(tái)面,你都需要重新擦拭一次,并使用70%乙醇消毒臺(tái)面,再使用紫外照射消毒30分鐘以上;


    2 操作臺(tái)面內(nèi)只放和本次實(shí)驗(yàn)操作有關(guān)系的實(shí)驗(yàn)工具,放置時(shí)按照分類和使用習(xí)慣來(lái)合理放置,切勿堆放在一起,也不要太靠近外部邊緣。


    3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如果培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多孔板已打開蓋子,那么手部和任何其他物品都不應(yīng)該越過(guò)敞口上方,否則將可能把微生物帶入器皿內(nèi);


    4.所有的實(shí)驗(yàn)操作,都應(yīng)該在你的視野范圍內(nèi)進(jìn)行,也就是你在操作時(shí),必須能看到實(shí)驗(yàn)工具的整體,這是為了避免因盲區(qū)導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)工具的末端觸碰到其他物品、臺(tái)面或你的身體部位,導(dǎo)致污染;


    5.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如果出現(xiàn)試劑、培養(yǎng)物液體滴在臺(tái)面,應(yīng)停止當(dāng)前操作,并立即用70%乙醇擦拭臺(tái)面;


    6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,所有實(shí)驗(yàn)物品都應(yīng)搬離臺(tái)面,并再次擦拭清潔,最后用70%乙醇消毒;


    個(gè)人衛(wèi)生

    1 穿實(shí)驗(yàn)服、佩戴口罩和外科滅菌手套,長(zhǎng)頭發(fā)的同學(xué)應(yīng)把頭發(fā)扎在腦后,佩戴的手套的上緣應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)服的袖口重疊在一起,就是把袖口末端塞進(jìn)手套內(nèi);


    2 手套在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,不管是否有移出生物安全柜以外的范圍,都應(yīng)間隔一段時(shí)間就使用70%乙醇擦拭一次;


    3 如果感染了疾病,例如感冒,則應(yīng)該暫緩實(shí)驗(yàn)或佩戴面罩后再進(jìn)入細(xì)胞間做實(shí)驗(yàn);


    4 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如果實(shí)驗(yàn)操作者和培養(yǎng)物之間有玻璃間隔,可以說(shuō)話,但應(yīng)該盡量少說(shuō)話。


    試劑和培養(yǎng)基

    1 從外部采購(gòu)的試劑和培養(yǎng)基,如果有外包裝,包括紙盒、薄膜等,都應(yīng)該在細(xì)胞間外去除后,再使用70%乙醇消毒外表面后才放入操作臺(tái)面;


    2 如果實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,這些試劑、培養(yǎng)基曾拿出過(guò)生物安全柜以外的范圍,例如放入了冰箱、培養(yǎng)箱、水槽等,需要重新擦拭干凈后用70%乙醇消毒,然后才可以再次放入操作臺(tái)面內(nèi)。


    培養(yǎng)物

    1. 在每一次實(shí)驗(yàn)之前,先用肉眼觀察細(xì)胞是否正常沒(méi)有污染,并在顯微鏡下再次檢查確認(rèn),如果污染則應(yīng)停止該次實(shí)驗(yàn)并清理掉細(xì)胞;細(xì)胞拿進(jìn)生物安全柜之前,同樣需要用70%乙醇擦拭培養(yǎng)器皿外表面;


    2 每一批次的細(xì)胞,在培養(yǎng)周期內(nèi),都應(yīng)該取一部分出來(lái)單獨(dú)使用無(wú)抗生素的(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè),判斷其是否有潛在污染,這是為了排除抗生素對(duì)污染的干擾。


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